Actualidad Avipecuaria
Sunday, 22 October del 2017

Alfredo Condemarin1, Ana Mansilla1, Massimiliano Baratelli1, Ofelia Alzamora2, Giovanna Cribillero2; Rosa Gonzáles2; Eliana Icochea2

1. Laboratiorios HIPRA. 2 Laboratorio de Patología Aviar Facultad de Medicina Veterinaria Universidad Nacional Mayor de San Marcos.



Protección inducida por dos programas de vacunación contra la enfermedad de Newcastle usando una vacuna clonada

El estudio comprendió cuatro grupos de aves: dos grupos vacunados y desafiados, un grupo no vacunado y desafiado y un grupo no vacunado no desafiado. Los grupos se clasificaron de acuerdo al programa de vacunación según la vía de administración y desafío.

Protección inducida por dos programas de vacunación contra la enfermedad de Newcastle usando una vacuna clonada
Septiembre 28/2017
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1.OBJETIVO

El objetivo del presente estudio fue evaluar la protección inducida contra la enfermedad de Newcastle, en pollos de engorde vacunados con la vacuna HIPRAVIAR® CLON y desafiados con una cepa velogénica viscerotrópica del virus genotipo XII.

2.MATERIALES Y MÉTODOS

El experimento se realizó en los ambientes de bioseguridad del Laboratorio de Patología Aviar de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, ubicada en el distrito de San Borja, provincia de Lima, desde el 09 de marzo al 18 de abril del 2017. Se utilizaron 140 pollos machos de 1 día de edad de la línea Ross 308 provenientes de un mismo lote de reproductoras.

120 aves fueron sometidas a la prueba y 20 aves fueron sometidas a evaluación del status sanitario. Se usó un alimento comercial conteniendo una fórmula convencional para pollos de carne de acuerdo a los requerimientos nutricionales según las fases de crianza.

La administración del alimento y el agua de bebida fue ad libitum. Se evaluó la vacuna comercial “HIPRAVIAR® CLON”, una pastilla liofilizada conteniendo el virus vivo atenuado de la cepa “clon CL/79” de la enfermedad de Newcastle, con un título de 106,5- 107,7 EID50/dosis, fabricada por los Laboratorios Hipra S.A. La vacuna fue preparada y administrada según las instrucciones del fabricante. La crianza se realizó en baterías ubicadas en la unidad experimental del Laboratorio de Patología Aviar de la FMV-UNMSM, bajo condiciones de bioseguridad controlada. La evaluación se realizó utilizando 120 pollos de engorde de 1 día de edad, distribuidos en cuatro grupos experimentales de 30 aves cada uno. Además se evaluaron 20 aves adicionales del mismo lote mediante pruebas serológicas y microbiológicas, para determinar el estado sanitario de los grupos experimentales.

El estudio comprendió cuatro grupos de aves: dos grupos vacunados y desafiados, un grupo no vacunado y desafiado y un grupo no vacunado no desafiado. Los grupos se clasificaron de acuerdo al programa de vacunación según la vía de administración y desafío:

Grupo T1: Aves vacunadas al 1º, 8º y 18º día de edad, vía gota ocular. Desafiadas.

Grupo T2: Aves vacunadas al 1º y 8º día de edad vía gota ocular, y 18º día de edad vía agua de bebida. Desafiadas.

Grupo T3: Aves no vacunadas y desafiadas.

Grupo T4: Aves no vacunadas ni desafiadas.

A los 30 días de edad, todas las aves fueron desafiadas por vía gota ocular con una cepa velogénica viscerotrópica del virus de la ENC, usando 50 μL de un inóculo con un título de 106 DIE 50. Para el desafío se usó una cepa viscerotrópica velogénica del genotipo XII, aislada y secuenciada en el Laboratorio de Patología Aviar de la FMVUNMSM.

La cepa consiste en el fluido alantoideo de primer pasaje en huevos embrionados SPF de 9 días de edad, inoculados con muestras de tráquea y pulmones de pollos infectados, siguiendo el protocolo de OIE. La mortalidad de los embriones fue a las 48 horas post inoculación, se colectó el fluido alantoideo, se confirmó la actividad hemaglutinación del fluido y la presencia del virus de la enfermedad de Newcastle por la prueba de Inhibición de la Hemoaglutación usando un suero monoespecífico conteniendo anticuerpos contra el virus de la enfermedad de Newcastle. Para determinar la patogenicidad de la cepa se realizó el Índice de Patogenicidad Intracerebral (IPIC) siguiendo el protocolo del Dr. Alexander (1998). Se inocularon 10 pollos SPF de 1 día de edad con 0.05 mL de una dilución de 1:10 del fluido alantoideo colectado. Las aves fueron evaluadas durante 8 días continuos, registrándose el escore de mortalidad (2), enfermedad (1) o salud (0), dando un resultado final de un IPIC de 1.92, correspondiente a los virus velógenicos de la enfermedad de Newcastle.

La secuencia completa del genoma fue amplificada y analizada con MEGA 6.0 utilizándose el SnapGene. El análisis filogenético de la región codificada del gen F colocó a la cepa dentro de la clase II, Genotipo XII, sub genotipo XIIa, conjuntamente con la cepa Poultry/Perú/1918-03/2008 (GI: 365822536) y otras siete cepas del virus que fueron previamente aisladas en Perú. La secuencia completa del genoma de la cepa Chicken/Arequipa-Peru/VFAR81/2015 (GenBank accesion no. KU594618).

3. PARÁMETROS DE EVALUACIÓN

Evaluación de estado sanitario. Se evaluaron 20 aves pertenecientes al mismo lote de las aves utilizadas para la prueba mediante una evaluación de microbiología.

- Signos clínicos post desafío:

Todas las aves fueron evaluadas diariamente durante 10 días post desafío, considerando como presencia=1 y ausencia=0 las siguientes presentaciones:

• Signos generales: Depresión, diarrea, plumas erizadas, ronquera, edema facial, conjuntivitis, estornudos, secreciones nasales y oculares.

• Signos nerviosos: Parálisis, opistótonos y tic nervioso.

- Mortalidad:

Todas las aves muertas fueron necropsiadas en busca de lesiones macroscópicas compatibles con la enfermedad de Newcastle.

- Respuesta serológica:

• La respuesta serológica fue evaluada por la prueba de ELISA, usando un Kit CIVTEST® NDV del Laboratorios Hipra.

• Se analizaron 20 aves de 1º día de edad.

• 20 aves por grupo experimental con sangre colectada al día 18 antes de la vacunación, a los 30 días, día del desafío y a los 40 días, final de la prueba.

4. RESULTADOS

Signos clínicos y mortalidad

A partir del día 2 post desafío, las aves del grupo T3 presentaron signos respiratorios y depresión significativamente mayores que los grupos vacunados (Cuadro 2). Una manifestación de la enfermedad de Newcastle es la diarrea verdosa consecuencia de las parálisis, depresión e inanición de las aves. 

Posterior al desafío las aves del grupo T3 presentaron severa diarrea verdosa a partir del segundo día post desafío mientras que las del grupo vacunado T2 presentaron signos de escasa diarrea verdosa al cuarto día post desafío. No se observó diarrea verdosa en las aves del grupo T1 (Cuadro 3).

Únicamente las aves del grupo control presentaron signos nerviosos, consistentes en parálisis, tics y tortícolis, siendo afectadas el 50% de las mismas.

Posterior al desafío dentro de los grupos vacunados, sólo las del grupo 2 presentaron mortalidad por ENC, acumulando durante los 10 días post reto 3% de mortalidad. La mortalidad de las aves del grupo control T3 empezó al día 2 post desafío, llegando al 100% al día 6 post desafío (Gráfico1).

Serología. Los sueros colectados de las aves de 1 día de edad pertenecientes al mismo lote de las aves de la prueba fueron procesadas con el kit de IDEXX para la evaluación de anticuerpos maternales contra los virus de Gumboro (IBD), Bronquitis infecciosa (IBV), Reovirus (REO), Anemia infecciosa (CAV), Mycoplasma (MG – MS) encontrándose todos ellos dentro de los valores normales. En la titulación de anticuerpos contra la enfermedad de Newcastle realizada con el Kit CIVTEST NC, todas las aves presentaron anticuerpos maternales con un PGT de 6026.7 y un CV de 36.7%.

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