Saturday, 23 September del 2017


Determinación de concentraciones tisulares residuales y el tiempo de retiro de la fosfomicina en pollos parrilleros Concentraciones tisulares y tiempo de retiro del antibiótico fosfomicina en pollos de engorde: estudio en musculo – administración oral

Aunque existen diferentes formulaciones farmacéuticas de fosfomicina, solo se utiliza la sal cálcica en pollos para su administración vía oral; mientras que la sal disódica, más hidrosoluble, se utiliza vía intramuscular

Determinación de concentraciones tisulares residuales y el tiempo de retiro de la fosfomicina en pollos parrilleros  Concentraciones tisulares y tiempo de retiro del antibiótico fosfomicina en pollos de engorde: estudio en musculo – administración oral
Octubre 10/2016
Lima - Perú
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Introducción

La fosfomicina (cis-1, 2-ácido epoxy fosfónico) es un antibiótico bactericida de amplio espectro. Estructuralmente no se relaciona a otra clase de agentes antimicrobianos. La fosfomicina actúa dentro del citoplasma de la bacteria (Popovic et al., 2010). Sumecanismo de acción está basado en la inhibición de la pared celular y la síntesis temprana de péptidoglicanos de mureína en la proliferación de la bacteria (Kahan et al., 1974). Inhibe un paso de la síntesis inicial del peptidoglicano, desencadenado por el difosfato de uridina N-acetil-glucosamina-enol-piruviltransferasa (Kahan et al., 1974; Lin, 1976; Popovic et al., 2010), causando una actividad bactericida contra las bacterias Gram positivas y Gram negativas (Gobernado, 2003). Por lo tanto, cuando se compara con otros antibióticos, la actividad de la fosfomicina in vitro tiene un espectro más amplio de acción que las penicilinas y las cefalosporinas semi sintéticas (Mata et al., 1977). Por el otro lado, no se ha reportado resistencia cruzada con otros antibióticos (Gobernado, 2003).

Se ha sugerido el uso de la Fosfomicina en animales y humanos gracias a su baja toxicidad y su eficacia (Gallego et al., 1974). Su administración vía oral, se ha utilizado bajo su forma de sal cálcica, y vía intravenosa e intramuscular como sal disódica. La sal fosfomicina – trometamina es altamente hidrosoluble y tiene una buena biodisponibilidad oral en humanos (Patel et al., 1997; Borsa et al.1988; Popovic et al., 2010).

La fosfomicina es ampliamente utilizada en producción animal debido a su rápido efecto, buena tolerancia y ausencia de efectos secundarios (Aramayona et al., 1997; Carraminana et al., 2004). Particularmente en pollos de engorde, este antibiótico ha sido utilizado para el tratamiento de enfermedades infecciosas causadas por mycoplasmas (Mycoplasma gallisepticum y sinoviae) y bacterias Gram negativas y Gram positivas (Salmonella, E. coli, Haemophilus paragallinarum, Pasteurella multocida, Staphylococcus y Listeria) (Fernandez et al., 2001; 2002).

La administración de drogas en animales de producción para consumo humano sin un período de retiro adecuado (WDT, por sus siglas en inglés) pudiese guiar a concentraciones no permitidas de residuos en alimentos para consumo humano. Estos residuos representan un riesgo para la salud pública incluyendo la estimulación de resistencia bacteriana, alteraciones en la microflora intestinal y reacciones de hipersensibilidad. Por lo tanto, para asegurar la entrega de productos de origen animal seguros para los consumidores, se debe respetar el tiempo de retiro (WDT) de las drogas. En términos generales, el WDT es el período de tiempo requerido después de la culminación del tratamiento para que las concentraciones de la droga en tejido y/o sus metabolitos disminuyan a menos de lo establecido como Límite Máximo de Residuos (MRLs por sus siglas en inglés) (Riviere et al., 1998; KuKanich et al., 2005).

Con el objetivo de minimizar el riesgo en la salud humana según los lineamientos de bienestar aprobados por la bioética representada por residuos en productos alimenticios, se han establecido los MRLs para una variedad drogas por diferentes entes regulatorios de distintos países. Sin embargo, la Agencia Europea para la Evaluación de Productos Medicinales (EMEA, por su siglas en inglés) y la Comisión Europea no han establecido los MRLs para la fosfomicina. La Fundación de Investigación Química de Alimento Japonesa ha establecido los MRLs en 0.5 μg/g para músculo, hígado, riñón y grasa de ganado y un MRL de 0.05 μg/mL para la leche. Sin embargo, no se han establecido los MRLs para el tejido del pollo por ninguna agencia regulatoria.

En la administración extra vascular de una droga, la formulación farmacéutica puede condicionar la tasa de absorción y en consecuencia la fase final de eliminación. De acuerdo a esto, una formulación puede requerir un WDT más largo cuando la droga se elimina en un período mayor de los tejidos. De otra manera, se puede utilizar un WDT más corto cuando se ha comprobado adecuadamente que la eliminación es más rápida (KuKanich et al., 2005). Por consiguiente, la administración de una u otra formulación de la misma droga lleva a concentraciones no permitidas de residuos si no se han considerado los WDTs individualmente.

Aunque existen diferentes formulaciones farmacéuticas de fosfomicina, solo se utiliza la sal cálcica en pollos para su administración vía oral; mientras que la sal disódica, más hidrosoluble, se utiliza vía intramuscular (Soraci et al., 2011a, b). No obstante y tomando en cuenta que la fosfomicina es un antibiótico ampliamente utilizado en producción, el WDT en tejido de pollo no ha sido investigado.

Aramayona et al. (1997) ha investigado las concentraciones de residuo de la fosfomicina en el músculo, hígado y grasa de pollo en ensayos microbiológicos con un límite de detección de 0.5 μg/mL.

El presente estudio tuvo como objetivo principal el determinar las concentraciones titulares residuales y el tiempo de retiro de la fosfomicina en pollos de engorde.

Diseño experimental:

Materiales y métodos:

Aves: Se emplearon 54 pollos de engorde clínicamente sanos de 30 días de edad. Los animales fueron alojados durante 21 días (duración del ensayo) en corrales de 5 m2, con cama de viruta y bebederos tipo Plasson de vaso invertido. La temperatura ambiente se mantuvo en 30ºC y las aves tuvieron libre acceso al agua y al alimento.

fosfomicina: La formulación de fosfomicina empleada (fosfomicina cálcica, formulación comercial Fosbac®), fue pesada y mezclada en el alimento a razón de 40 mg/kg de peso vivo por ave y administrada con el mismo (ad libitum) durante 5 días consecutivos. Posteriormente, las aves recibieron sólo durante los 16 días restantes alimento balanceado libre de antibiótico y libre acceso al agua.

Muestreo:

Seis aves fueron sacrificados mediante punción del orificio occipital los días: 5, 6, 7, 8 10, 12, 14, 18 y 21 del ensayo previo ayuno de alimento de 8 hrs. Se tomaron muestras provenientes del músculo pectoral (100 g) y músculo isquiotibiales (100 g).

Las muestras de tejidos fueron colectadas en bolsas de nylon tipo Zipro® y almacenadas en congelador (-80ºC) hasta el ensayo.

Análisis:

No existiendo bibliografía específica a nivel internacional en relación a este objetivo, se desarrolló previamente una metodología analítica que permitiera determinar concentraciones residuales del antibiótico fosfomicina en músculo de pollo.

Se realizó la puesta a punto y validación de la metodología analítica, atendiendo a las exigencias internacionales, en los aspectos concernientes a los estudios de interferencia, linealidad, reproducibilidad, límite de cuantificación y detección mediante HPLC MS/ MS.

Las concentraciones residuales de fosfomicina en músculo fueron analizadas por HPLC MS/ MS. Muestras “Blancos” (libre de fosfomicina) de las diferentes matrices biológicas objeto de análisis, provenientes de animales sin antibiótico, fueron utilizadas como controles.

Análisis estadístico:

El tiempo de espera o retirada (Withdrawal time, WT) fue calculado mediante el empleo del programa estadístico WTM 1.4. The European Agency for the Evaluation of Medicinal Products (EMEA).

Resultados y Discusión:

En la Figura 1. se presenta la distribución de las concentraciones de fosfomicina en músculos pectorales e isquitibiales de pollos de engorde, luego de la administración oral durante 5 días consecutivos de fosfomicina cálcica a razón de 40 mg/kg en pollos de engorde.

La distribución de fosfomicina fue mayor en músculo isquiotibial con respecto a músculo pectoral, relacionada probablemente a una mayor irrigación sanguínea de dicha masa muscular.

En la figura 2 se observan las frecuencias de distribuciones acumuladas obtenidas en pollos de engorde luego de la administración de fosfomicina oral durante 5 días consecutivos.

En la figura 3 se presentar los valores estadísticos y el tiempo de retiro para fosfomicina, calculado mediante el empleo del software WT 1.4 de la EMEA, dando como resultado del cálculo un retiro de 1.12 días.

Conclusiones:

La administración de fosfomicina cálcica oral durante 5 días consecutivos a razón de 40 mg / kg en pollos de engorde mostró bajas concentraciones residuales en el músculo de pollo, relacionadas con la biodisponibilidad oral (F: 39 %) y la ausencia de unión a proteínas tisulares de la fosfomicina cálcica.

No existiendo en la bibliografía internacional, un límite máximo de residuos (LMR), determinado para fosfomicina en músculo, el tiempo de retiro de esta matriz biológica se realizó utilizando el valor de 0.5 pmm, valor del método de cuantificación más bajo, publicado por Aramayona et al., (2007), en pollos de engorde. En base a ello, un tiempo de retiro de 1.12 días fue calculado para fosfomicina en esta matriz biológica.

Bibliografía

  • Bioanalytical Method Validation, Guidance for Industry, U.S. Department of Health and HuMan Services; FDA; CDER; CVM; (2001)
  • Popovic, M., D. Steinort, S. Pillai and C. Joukhadar, 2010. Fosfomycin: An old, new friend? Eur. J. Clin. Microbiol. Inf. Dis., 29: 127-142.
  • Kahan, F.M., J.S. Kahan, P.J. Cassidy and H. Kropp, 1974. The mechanism of action of fosfomycin (phosphonomycin). Ann. N.Y. Acad. Sci., 235: 364-386.
  • Gobernado, M., 2003. Fosfomicina. Rev. Esp. Quimioterapia, Marzo., 16: 15-40.
  • Mata, J., A. Rodriguez and A. Gallego, 1977. Fosfomycin: In vitro activity. Chemother., 23: 23-24.
  • Gallego, A., A. Rodriguez and J.M. Mata, 1974. Fosfomycin: Pharmacological studies. Drugs Today, 10: 161-168.
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  • Borsa, F., A. Leroy, J.P. Fillastre, M. Godin and B. Moulin, 1988. Comparative pharmacokinetics of tromethamine fosfomycin and calcium fosfomycin in young and elderly adults. Antimicrob. Agents Chemother., 32: 938-941.
  • Aramayona, J.J., M.A. Bregante, C. Solans, S. Rueda, L.J. Fraile and M.A. Garcia, 1997. Pharmacokinetics of fosfomycin in chickens after a single intravenous dose and tissue levels following chronic oral administration. Vet. Res., 28: 581-588.
  • Carraminana, J.J., C. Rota, I. Agustin and A. Herrera, 2004. High prevalence of multiple resistance to antibiotics in Salmonellae serovars isolated from a poultry slaughterhouse in Spain. Vet. Microbiol. 104: 133-139.
  • Fernandez, A., C. Lara, A. Loste, S. Calvo and M.C. Marca, 2001. Control of Salmonella enteritidis phage type 4 experimental infection by fosfomycin in newly hatched chicks. Comparative Immunol, Microbiol. Infect. Dis., 24: 207.
  • Fernandez, A., C. Lara, A. Loste, S. Calvo and M.C. Marca, 2002. Efficacy of calcium fosfomycin for the treatment of experimental infections of broiler chickens with Escherichia coli O78:K80. Vet. Res. Commun., 26: 427.

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